Title腺相关病毒介导的VEGF<,165>基因转移改善小型猪慢性心肌缺血的研究
Authors邓晓莉
Affiliation北京大学
Keywords血管内皮生长因子 慢性心肌缺血 基因治疗 腺相关病毒 冠心病
Issue Date 1
Citation北京大学.
Abstract血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗是促血管生成治疗的研究热点。腺相关病毒(AAV)是一种新型载体,具有众多优点。研究表明,在小型动物急性下肢动脉或冠状动脉闭塞模型上,AAV介导的VEGF基因转移能够促进缺血组织侧支血管形成。本实验目的是在小型猪慢性心肌缺血模型上,观察重组腺相关病毒2型载体(rAAV2)介导的VEGF165基因转移促进冠状动脉侧支形成和改善缺血心肌血流及心功能的有效性。 第一部分:结扎左冠状动脉前降支建立小型猪急性冠状动脉闭塞模型,经微开胸心肌内注射rAAV2-VEGF165,并按剂量分成四个亚组: 1′1011 virus.genome (v.g)、 5′1011v.g、 1′1012v.g、 5′1012v.g。应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学染色、血管计数和冠状动脉造影术检测VEGF基因在心肌中的表达、评价其生物学作用并找出最合适剂量。结果各亚组均获得VEGF的有效表达且表达量随剂量而增加;1′1012v.g组及5′1012v.g组心肌毛细血管密度和冠状动脉侧支循环分级明显增加且两组之间无明显差异,故以1′1012v.g为最合适剂量。 第二部分:以Ameroid Constrictor建立小型猪慢性心肌缺血模型,经心电图、冠状动脉造影和核磁共振(MRI)确认左冠状动脉回旋支闭塞或相应心肌缺血后,经微开胸导入rAAV2-VEGF1651′1012v.g。采用RT-PCR、Western Blot及免疫组织化学染色检测VEGF的表达,通过心肌血管计数、冠状动脉造影和MRI观察其生物学效应。结果放置Ameroid Constrictor后5周,所有动物均成功建立慢性心肌缺血模型。导入基因后3个月外源VEGF 基因仍持续表达,6个月时表达下降。治疗后心肌毛细血管和小动脉密度均增加,心肌血流灌注明显改善,左心室收缩功能无显著变化。 结论 本研究初步证实了rAAV2-VEGF165能够促进小型猪慢性缺血心肌血管生成并改善心肌血流灌注,为rAAV2-VEGF165在冠心病治疗中的进一步应用奠定了基础。
URIhttp://hdl.handle.net/20.500.11897/373953
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