| Title | 人野生型survivin-1基因重组载体的构建及其在A549中的表达 |
| Other Titles | Construction of recombinant plasmid vector containing human survivin-1 gene and expression in lung adenocarcinoma A549 cells |
| Authors | 刘彦兵 李简 刘桐林 |
| Affiliation | 北京大学第一医院,胸外科,北京,100034 |
| Keywords | Survivin-1基因 基因克隆 真核表达载体 肺腺癌A549 |
| Issue Date | 2007 |
| Publisher | 中国现代医学杂志 |
| Citation | 中国现代医学杂志.2007,17,(6),683-685. |
| Abstract | 目的 克隆细胞凋亡抑制蛋白Survivin异构体之一Survivin-1(SVV-1)基因的编码序列,构建含SVV-1基因的真核细胞表达载体并在肺腺癌细胞系A549中高表达,为进一步研究该基因在肺腺癌发病中的作用奠定基础.方法 根据已发表的SVV-1基因的核苷酸序列自行设计一对分别含有BamHI和Xho l双酶切位点的survivin-1基因上下游引物,以A549细胞系抽提的RNA为模板进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物用Bam HI和XhoI双酶酶切后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.0中,用限制性内切酶酶切重组质粒pcDNA3 0-SVV-1和DNA序列测定进行鉴定.用脂质体法将pcDNA3.0-SVV-1导入肺腺癌细胞系A549中,嘌呤霉素选择培养,经免疫组化法和western blot鉴定其表达.结果 RT-PCR扩增出长448 bp的特异性片段,经克隆至pcDNA3.0后酶切鉴定证实,并测序表明序列与Gen-Bank报道完全一致.pcDNA3.0-SVV-1在A549细胞中有稳定表达.结论 成功克隆了SVV-1的编码序列,构建了其真核细胞表达载体pcDNA3.0-SVV-1,有助于对SVV-1基因在腺癌发生中的致瘤机制做进一步研究. |
| URI | http://hdl.handle.net/20.500.11897/115965 |
| ISSN | 1005-8982 |
| DOI | 10.3969/j.issn.1005-8982.2007.06.012 |
| Indexed | 中文核心期刊要目总览(PKU) 中国科技核心期刊(ISTIC) 中国科学引文数据库(CSCD) |
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