Title胃癌细胞MGC-803耐药细胞株的建立及分泌蛋白差异分析
Other TitlesEstablishment of drug resistant cell line of MGC-803 and analysis of differential secretome
Authors黄昊
韩勇
吴健
田志华
曲立科
寿成超
Affiliation北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所,恶性肿瘤发生机制及转化研究教育部重点实验室,北京100142
Keywords胃肿瘤 抗药性,多药 泛素蛋白连接酶 蛋白质组学 Stomach neoplasms Drug resistance,multiple Ligases,ubiquitin-protein Proteomics
Issue Date2014
Publisher北京大学学报 医学版
Citation北京大学学报(医学版).2014,46,(2),183-189.
Abstract目的:应用蛋白质组学技术系统比较5-氟尿嘧啶、紫杉醇及顺铂耐药细胞与敏感细胞的分泌蛋白表达谱,以期发现胃癌耐药相关分泌蛋白标志物,为临床选择有针对性的化疗药物提供依据.方法:通过药物梯度诱导建立胃癌MGC-803耐药细胞株.从培养上清中收集MGC-803亲代及耐药细胞的分泌蛋白,应用双向凝胶电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)进行分离,通过PD Quest 7.1.0软件分析获得差异蛋白,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)进行鉴定,并用实时定量PCR检测各差异蛋白在耐药细胞株和亲本细胞间mRNA水平上的表达差异.结果:分别建立了对5-氟尿嘧啶、紫杉醇及顺铂耐药指数为110.6、70.0和13.3的耐药细胞株.顺铂耐药细胞对5-氟尿嘧啶和紫杉醇、5-氟尿嘧啶耐药细胞对紫杉醇均有较强的交叉耐药,前者耐药指数分别为23.5和114.0,后者为70.0.制备获得了耐药细胞培养上清的双向凝胶电泳蛋白组分图谱;经PD Quest软件分析获得18个差异在2倍以上、3株耐药细胞培养上清中丰度均增高的蛋白点,其中13个得到了质谱鉴定,它们分别属于蛋白酶类、信号转导分子等.与亲本细胞相比,在mRNA水平上,SLMAP、TOP3A、DYNC1H1、RHPN1、PUF60和SIAH1在3种耐药细胞中皆有明显上调;IFT172、FILIP在耐5-氟尿嘧啶和紫杉醇细胞中上调显著;PLVAP、LMNA在耐紫杉醇及顺铂细胞中表达有所升高,但在耐5-氟尿嘧啶细胞中升高不显著.在蛋白水平上的进一步验证发现,SIAH1在3种耐药细胞中的表达量及培养上清中的含量皆有升高.结论:本研究以胃癌细胞MGC-803为亲本细胞分别建立了针对5-氟尿嘧啶、紫杉醇及顺铂的耐药细胞株,在此基础上应用双向电泳及蛋白质谱技术,整体展示了耐药细胞与亲本细胞的差异分泌蛋白,并发现SIAH1蛋白在耐药细胞总蛋白及培养上清中的含量均明显升高,其有可能成为研发胃癌血清耐药标志物的候选分子.
URIhttp://hdl.handle.net/20.500.11897/214043
ISSN1671-167X
DOI10.3969/j.issn.1671-167X.2014.02.002
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