靶向突变K-ras基因的小干扰RNA体内外抑制肺癌细胞生长的研究

Abstract

目的 探讨应用小干扰RNA(siRNA)敲除突变K-ras基因对肺癌细胞H441体内外生长的抑制作用.方法 构建真核表达载体pSilencer3.1-K-rasV12,转染H441细胞后应用半定量RT-PCR及Western blotting检测突变K-ras基因mRNA及蛋白质的表达变化,噻唑蓝法检测H441细胞增殖速度的变化,流式细胞仪检测H441细胞凋亡率的变化.裸鼠皮下移植pSilencer3.1-K-rasV12处理的H441细胞,观察其成瘤性的改变.结果 测序证实pSilencer3.1-K-rasV12真核表达载体构建成功.RT-PCR灰度比值结果示空载体组、阴性对照组、实验组K-ras mRNA相对表达量分别为:93.7%±2.2%、95.1%±2.5%、43.6%±3.1%,差异有统计学意义(F=78,P＜0.01);Western blotting结果示空载体组、阴性对照组、实验组K-ras蛋白相对表达量分别为:98.1%±2.4%、97.5%±2.0%、33.5%±3.7%,差异有统计学意义(F=93,P＜0.01);经pSilencer3.1-K-rasV12作用的H441细胞生长受到明显抑制(P＜0.05),凋亡率较对照组明显升高(F=8.9,P＜0.01),H441细胞在裸鼠体内生长受到明显抑制.结论 靶向突变K-ras基因的siRNA可以抑制肺癌H441细胞在体内外的生长速度,诱导细胞凋亡,为肺癌的基因治疗提供了新的思路和方法.