白细胞介素-21对 RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响

Abstract

目的：了解白细胞介素-21（ IL-21）诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞向破骨细胞分化的作用，并探讨其可能的机制。方法1、以不同浓度IL-21（0，1，10，20，40 ng／ml）处理RAW264.7细胞，培养5天后进行抗酒石酸酸性磷酸酶（ TRAP）染色，Western Blot和免疫组化法检测降钙素受体（CTR）表达，采用Real time PCR 法检测CTR和组织蛋白酶（Cathepsin）-K的mRNA表达水平。2、以信号通路抑制剂AG490、LY294002和PD98059作用30min后再加入IL-21，培养5天后观察破骨细胞形成情况，以Western Blot检测IL-21作用不同时间点时信号通路分子总蛋白和磷酸化蛋白水平，探讨IL-21直接诱导破骨细胞分化的作用机制。结果1、在无RANKL作用的情况下，随着IL-21浓度增加TRAP阳性细胞数逐渐增多，20 ng／ml作用最强，40ng／ml时减弱。 IL-21能够诱导破骨标志分子CTR和Cathepsin-K mRNA水平表达上调。 Western Blot和免疫细胞化学证实，与阴性组比较，IL-21能促进 CTR 蛋白水平表达增高。2、PI3K-AKT 通路抑制剂（ LY294002）可以显著抑制 IL-21诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化，IL-21刺激5～15 min时p-AKT表达增强。结论 IL-21可不依赖RANKL直接诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞向破骨细胞分化，该作用可能由PI3K-AKT通路介导。