靶向突变K-ras基因的小干扰RNA体内外抑制肺癌细胞生长的研究

Abstract

目的：观察应用小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)敲除突变K-ras基因对肺癌细胞H441体内外生长的抑制作用，探讨突变K-ras基因作为肺癌基因治疗靶点的可行性及有效性。方法：构建真核表达载体pSilencer3.1-K-rasV12，应用RNA干扰(RNAi)抑制H441细胞突变K-raS基因的表达，半定量RT-PCR及Western blotting检测突变K-ras基因mRNA及蛋白质的表达变化，噻唑蓝(MTT)法检测H441细胞增殖速度的变化，流式细胞仪检测H441细胞凋亡率的变化。裸鼠皮下移植pSilencer3.1-K-rasV12处理的H441细胞，观察其成瘤性的改变。结果：测序证实pSilencer3.1-K-rasV12真核表达载体构建成功。H441细胞经pSilencer3.1-K-rasV12转染后RT-PCR灰度比值结果示空载体组、阴性对照组、实验组K-rasmRNA相对表达量分别为：93.7%±2.25%、95.1%±2.48%、43.6%±3.13%，差异有统计学意义(F=78，P<0.01)；Westernblotting结果示空载体组、阴性对照组、实验组K-ras蛋白相对表达量分别为：98.1%±2.37%、97.5%±2.02%、33.5%±3.68%，差异有统计学意义(F=93，P<0.01)；经pSileneer3.1-K-rasV12作用的H441细胞生长受到明显抑制(P<0.05)，凋亡率较对照组明显升高(F=8.9，P<0.01)，H441细胞在裸鼠体内生长受到明显抑制。结论：靶向突变K-ras基因的siRNA可以抑制肺癌H441细胞在体内外的生长速度，诱导细胞凋亡，为肺癌的基因治疗提供了新的思路和方法。