Title禽流感病毒H5N1亚型血凝素蛋白的表达及ELASA方法的建立
Authors屠静
冯海
张浩
彭宜红
Affiliation北京大学医学部病原生物学系,北京 100083
KeywordsH5N1亚型禽流感病毒 血凝素蛋白 重叠延伸PCR 间接ELISA法 AIV抗体检测
Issue Date2007
Citation2007生命科学领域青年科学家年会论文汇编暨第五届北京生命科学领域联合年会论文汇编中国生物工程学会;北京生物工程学会..
Abstract目的:表达禽流感病毒IAvain Influenza Virus,AIV)H5N1亚型血凝素蛋白(Hemagglutinin,HA),建立AIV间接ELISA方法,检测鸡群血清中H5亚型AIV抗体。 方法:根据GenBank中H5N1亚型Vetnam株病毒的HA基因序列分段合成100~150bp的DNA片段,覆盖整个HA基因;并根据HA基因序列设计引物,用重叠延伸PCR(gene splicing by overlapextension PCR,SOE PCR or Overlap PCR)技术,将分段合成的DNA片段连接成H5N1病毒HA全长基因。将此人工合成的基因克隆入哺乳类动物表达载体pcDNA-Myc-His中,在HEK 293T细胞中表达后获得重组HA蛋白,用此蛋白作为抗原建立ELISA检测技术,检测用H5禽流感疫苗免疫的鸡群和未免疫鸡群血清中的抗体,并用Westem Blot进行确证。 结果和讨论:本研究验证了采用上述方法获得HA抗原的可行性。此外,用表达的HA蛋白建立了禽流感病毒ELISA技术。并且用该方法能特异性检测到免疫鸡群中抗禽流感病毒H5亚型抗体。本研究中建立的平台对其他突发性传染病的快速诊断、疫苗研制、以及减少研究过程中有关的生物危害性等问题提供了一个新的思路和途径。
URIhttp://hdl.handle.net/20.500.11897/282109
Appears in Collections:基础医学院

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