原位杂交检测HCV在体外的复制

Abstract

根据丙型肝炎病毒(HCV)的高保守5′-非编码区域(5′NCR)的 cDNA,以 PCR 设计软件辅助设计、合成其扩增引物,以含有 HCV 基因组 cDNA 的重组质粒为模板,用不对称 PCR 进行扩增得到预期单链。在 PCR 反应体系中加入地高辛标记核苷酸直接进行标记,所得到的单链 DNA 探针用于 HCV 体外复制的测定。原位杂交结果显示,HCV 的单链 DNA 探针可从核酸杂交水平检测到 HCV 细胞感染模型中复制型及复制中间体 HCV RNA 的合成,表明在该细胞培养模型中 HCV 呈高效复制。