TitleTet-on慢病毒调控系统的构建及其调控作用
Other TitlesEstablishment of Tetracycline-induced gene expression system based on the lentiviral vector
Authors韩海勃
赵威
张志谦
Affiliation北京大学临床肿瘤学院,北京肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所,恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室,北京,100142
Keywords四环素
慢病毒
基因调控
基因工程
基因克隆
荧光显微术
Issue Date2011
Publisher解剖学报
Citation解剖学报.2011,42,(6),756-760.
Abstract目的 构建四环素诱导基因表达的3代慢病毒系统,为慢病毒介导的基因治疗提供实验依据.方法 将四环素调控的转录激活因子(rtTA和M2rtTA)分别克隆入带有新霉素(neo)筛选标记的慢病毒载体中,得到pELNS-rtTA-IRES-Neo和pELNS-M2rtTA-IRES-Neo质粒,将四环素顺式应答作用元件(TETO和TREpitt)和绿色荧光蛋白(GFP)克隆入带有杀稻瘟素(blasticidin)筛选标记的慢病毒载体中,得到plenti6-TETO-GFP和plenti6-TREpitt-GFP质粒,将pELNS-rtTA-IRES-Neo与plenti6-TETO-GFP和pELNS-M2rtTA-IRES-Neo与plenti6-TREpitt-GFP分别以10∶1共同转染293细胞,用四环素类似物强力霉素(Dox)诱导GFP基因表达,48h后检测GFP表达.结果 成功构建了1代四环素调控体系pELNS-rtTA-IRES-Neo和plenti6-TETO-GFP重组质粒.共转染293细胞后,Dox诱导组的细胞有较强的GFP表达,阳性率约为90%,而未加Dox组细胞GFP阳性表达率约为30%.成功构建了2代四环素调控体系pELNS-M2rtTA-IRES-Neo和plenti6-TREpitt-GFP重组质粒.共转染293细胞后,Dox诱导组的细胞有较强的GFP表达,阳性率约为95%,而未加Dox组细胞未见GFP表达.结论 2代四环素调控体系3代慢病毒系统可以高效诱导目的基因表达,且目的基因背景表达值低.
URIhttp://hdl.handle.net/20.500.11897/33796
ISSN0529-1356
DOI10.3969/j.issn.0529-1356.2011.06.008
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