抗HER-2人源单抗的研制及HER-2模拟抗原表位的筛选

Abstract

HER2/c-erbB2/neu过度表达见于多种恶性肿瘤.作为肿瘤抗原,HER-2是一个理想的肿瘤治疗靶点.作者在对实验室已制备的抗HER-2单抗进行生物学活性鉴定的基础上,对其中一株较为理想的单抗进行了初步人源化改造.构建了抗人HER-2人-鼠嵌合抗体真核表达载体PWSD2-V<,κ>-V<,H>,并在CHO-dhfr<'->细胞中稳定表达.ELISA检测结果提示表达的人-鼠嵌合抗体可与HER-2分子特异性结合.通过对单抗的人源化改造,降低了鼠源性抗体的免疫原性,从而为进一步应用研究奠定了基础.目前,针对HER-2的人源化抗体Herceptin已被美国FAD批准用于治疗HER-2过度表达的转移性乳腺癌.为模拟HER-2与该抗体结合的有效表位,并为研制HER-2疫苗奠定基础,我们以Herceptin为靶分子对噬菌体随机12肽库进行了液相Bio-panning,得到能与Herceptin特异性结合的12肽H98,将编码该小肽的DNA片段克隆到表达载体pGEX-4T1中.经大肠杆菌BL21表达的融合蛋白GST-H98,分别用ELISA和Western blot检测均可与Herceptin特异性结合,并能竞争抑制HER-2与Herceptin的结合,同时可阻断Herceptin对肿瘤细胞的生长抑制作用.用GST-H98融合蛋白免疫小鼠可诱导产生针对小肽H98和HER-2的体液免疫反应;小肽H98可刺激经GST-H98免疫小鼠的T细胞增殖,上述实验结果和相关的三维结构分析均提示H98可模拟HER-2的抗原表位.通过分段表达小肽H98证明,小肽羧基末端的2个氨基酸和氨基端的第3、4位氨基酸在小肽与Herceptin的结合中发挥重要作用.综上所述,经肽库筛选获得的小肽H98为抗HER-2小分子疫苗的研发提供了候选分子,有潜在的应用价值.