云南省恶性疟原虫Pfcrt基因exon2区72-76编码序列多态性的分析

Abstract

目的 分析云南省恶性疟病例中恶性疟原虫氯喹抗性转运蛋白(Plasmodium falciparum chloroquine resistant transporter,Pfcrt)基因exon2区72～76编码(简称72～76编码)序列的多态性,为了解云南省抗氯喹恶性疟的流行现状提供依据. 方法 2012年8月至2015年9月,从云南省除迪庆、文山、昭通以外的13个州(市)收集恶性疟病例的滤纸血样和相关信息,通过流行病学调查判定感染来源地,根据中国疾病预防控制中心传染病报告信息管理系统疫情登记确认病例发现地.用巢式PCR扩增患者血样中的恶性疟原虫Pfcrt基因exon2区并测序,用MEGA 5.04分析72～76编码序列的多态性,计算变异位点、序列间遗传距离等.用IBM SPSSStatistics 21软件对分类变量72～76编码多态在各人群中的构成比进行分析. 结果 从2012年8月至2015年9月,共收集恶性疟病例血样232份,病例感染来源地有云南、非洲、缅甸等流行区.其中210份血样巢式PCR扩增阳性,序列分析显示,72～76编码序列存在CVMNK氯喹敏感型和CVIET、SVMNT、CVMNT氯喹抗性型,所占比例分别为15.2％ (32/210)、76.2％ (160/210)、6.7％ (14/210)和1.9％ (4/210).氯喹敏感性型CVMNK在19～55岁、农民、感染地为东南亚(缅甸161例、柬埔寨1例)等病例中检出的比例分别为100％ (32/32)、46.9％ (15/32)和59.4％ (19/32),高于同组其它病例的0、31.3％ (10/32)和37.5％ (12/32) (x2=13.674,8.478,6.292,P＜0.05);氯喹抗性型CVIET、SVMNT在感染地为缅甸和柬埔寨的病例中的比例分别为81.3％(130/160)和78.6％(11/14),高于云南感染病例的6.3％ (10/160)和21.4％ (3/14) (x2=6.519,6.620,P＜0.05);非洲感染病例中的CVIET比例为12.5％ (20/160),未检测到SVMNT型.210条Pfcrt基因exon2区DNA序列的同源位点为145 bp,保守位点占95.2％ (138/145),变异位点占4.8％ (7/145),序列间遗传距离为0.000～0.036,平均为(0.012±0.005),3种氯喹抗性型CVIET、SVMNT、CVMNT与敏感型CVMNK的遗传距离平均分别为(0.029±0.015)、(0.021±0.013)和(0.014±0.001);检出氯喹抗性型疟原虫的178例病例分布在云南的13个州(市),其中,与缅甸接壤的德宏、保山、临沧3个州(市)以及云南中部的昆明市,检出氯喹抗性型的比例分别为51.7％ (92/178)、24.7％ (44/178)、5.6％(10/178)和4.5％ (8/178),居全省前4位. 结论 云南省恶性疟病例感染恶性疟原虫的Pfcrt基因exon2区72～76编码序列存在3种氯喹抗性型,氯喹抗性型恶性疟原虫的病例分布在全省81.3％ (13/16)的州(市).