| Title | 基于免疫共沉淀-液质联用技术的新型孕烷X受体配体检测方法的建立 |
| Other Titles | Identification of Pregnane X Receptor Ligands via an Immunoprecipitation/Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry Method |
| Authors | 赵爽 姜棋予 孙慧伟 柴燕涛 李晓娟 王志杰 侯俊 赵敏 |
| Affiliation | 北京大学三○二临床医学院,北京,100039 解放军第三○二医院临床研究管理中心,北京,100039 |
| Keywords | 孕烷X受体 免疫共沉淀 蛋白-小分子复合物 液质联用 |
| Issue Date | 2018 |
| Publisher | 生物技术通讯 |
| Citation | 生物技术通讯. 2018, 29(3), 397-403. |
| Abstract | 目的:建立基于免疫共沉淀-液质联用技术的新型孕烷X受体(PXR)配体检测方法.方法:在HEK293细胞中转染带有Flag标签的PXR表达载体,裂解细胞后用偶联Flag抗体的微珠(beads)结合并分离细胞中表达的Flag-PXR蛋白;以PXR的已知最为公认的配体/激动剂利福平为模型药物,配制1μmol/L利福平溶液,与结合有Flag-PXR蛋白的微珠孵育形成微珠-蛋白-利福平复合物;将微珠从体系中分离出来,用蛋白印迹实验检测复合物中的蛋白质,用液相色谱-质谱联用技术(液质联用技术)检测复合物中的利福平.在此基础上对利福平的作用进行验证,在肝细胞癌细胞HepG2中检测系列浓度梯度的利福平对PXR转录因子活性的影响.结果:用免疫共沉淀技术从HEK293细胞中分离鉴定得到Flag-PXR蛋白;用液质联用技术检测到蛋白与小分子复合物中的利福平;利福平能够剂量依赖地诱导PXR的转录因子活性.结论:建立了基于免疫共沉淀-液质联用技术的新型PXR配体检测方法. |
| URI | http://hdl.handle.net/20.500.11897/520572 |
| ISSN | 1009-0002 |
| DOI | 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.03.017 |
| Appears in Collections: | 医学部待认领 |
