DDR1对牙周膜细胞迁移和黏附的影响及相关机制

Abstract

目的:1)检测盘状结构域受体1 (discoidin domain receptor 1,DDR1)在人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)中的表达;2)探究DDR1在hPDLCs迁移与黏附活动中的作用和相关调控机制。方法:从6名牙周健康的志愿者的第三磨牙牙根表面牙周膜中获取原代hPDLCs,并采用普通PCR和免疫荧光技术检测牙周膜细胞中DDR1的表达;使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染hPDLCs敲低DDR1表达,并利用RT-qPCR检测敲低效率;通过细胞划痕试验和transwell迁移试验分别检测DDR1敲低前后hPDLCs水平和垂直迁移能力,通过细胞黏附试验检测其黏附能力的变化;对比DDR1敲低前后的hPDLCs,在经MEK-ERK1/2抑制剂PD98059和U0126处理后,检测DDR1敲低前后hPDLCs水平和垂直迁移能力,通过细胞黏附试验检测其黏附能力;用蛋白免疫印记法检测DDR1敲低前后hPDLCs中p-MEK1/2和p-ERK1/2的蛋白水平(MEK-ERK1/2信号通路的关键因子)。结果:在hPDLCs中可以检测到DDR1在RNA水平和蛋白水平上的表达。在RNA水平上,DDR1b是5种亚型中主要表达的亚型。敲低DDR1的表达以及使用PD98059和U0126均显著降低hPDLCs的迁移和黏附能力,但彼此没有协同作用。DDR1敲低后,p-MEK和p-ERK蛋白表达均明显下降。结论:研究表明,hPDLCs中主要表达的为DDR1五种亚型的DDR1b。此外,DDR1对hPDLCs的迁移和黏附发挥促进作用,其可能通过下游MEK-ERK1/2信号通路发挥促进作用。

目的:1)检测盘状结构域受体1 (discoidin domain receptor 1,DDR1)在人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)中的表达;2)探究DDR1在hPDLCs迁移与黏附活动中的作用和相关调控机制。方法:从6名牙周健康的志愿者的第三磨牙牙根表面牙周膜中获取原代hPDLCs,并采用普通PCR和免疫荧光技术检测牙周膜细胞中DDR1的表达;使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染hPDLCs敲低DDR1表达,并利用RT-qPCR检测敲低效率;通过细胞划痕试验和transwell迁移试验分别检测DDR1敲低前后hPDLCs水平和垂直迁移能力,通过细胞黏附试验检测其黏附能力的变化;对比DDR1敲低前后的hPDLCs,在经MEK-ERK1/2抑制剂PD98059和U0126处理后,检测DDR1敲低前后hPDLCs水平和垂直迁移能力,通过细胞黏附试验检测其黏附能力;用蛋白免疫印记法检测DDR1敲低前后hPDLCs中p-MEK1/2和p-ERK1/2的蛋白水平(MEK-ERK1/2信号通路的关键因子)。结果:在hPDLCs中可以检测到DDR1在RNA水平和蛋白水平上的表达。在RNA水平上,DDR1b是5种亚型中主要表达的亚型。敲低DDR1的表达以及使用PD98059和U0126均显著降低hPDLCs的迁移和黏附能力,但彼此没有协同作用。DDR1敲低后,p-MEK和p-ERK蛋白表达均明显下降。结论:研究表明,hPDLCs中主要表达的为DDR1五种亚型的DDR1b。此外,DDR1对hPDLCs的迁移和黏附发挥促进作用,其可能通过下游MEK-ERK1/2信号通路发挥促进作用。